DNA采血卡片:药物遗传学研究中DNA产量和质量的决定因素(7)
DNA采血卡片:药物遗传学研究中DNA产量和质量的决定因素(7)
DNA采血卡法的主要缺点是与新鲜静脉血样品相比,DNA回收量大。然而,通过使用这里描述的再隔离协议,DNA的数量可以很容易地增加.
这种观察的部分原因可以解释为,40%或更多的dna被保留在卡片矩阵上此外,由于白细胞在血液中所占比例等内在因素,患者标本间的dna含量变化很大。然而,这种变异主要来自于卡基质上的血量。然后一个因素是受调查人员的影响,他们应该意识到把卡片的样本收集区域完全染色的重要性。
虽然从DNA卡中纯化出的DNA量在需要微量的分子分析(如Southernblot或基因组克隆)中是有问题的,但它完全适用于SNP分析。我们的研究表明,从DNA卡中洗脱的DNA不仅可以用于进行WGA,而且可以用上述方法对所选择的多态性进行基因分型。获得的DNA数量可能允许使用这些多重PCR分析处理几十个到数百个多态性,特别是如果DNA采血卡上的所有血斑都被使用的话。这种多态分析能力通常足以满足药物遗传学研究所寻求的目标。如果需要额外的多态性分析,研究人员将需要使用WGA来获得足够数量的基因组DNA,这一方法在我们的研究中已经被证明是可行的。调查人员必须从病人中恢复较低数量的DNA的情况也是如此。
有传统的,非侵入性的血液采集的替代方法,例如使用口腔粘液取样。漱口水可提供高分子量的基因组DNA,为成年人提供了一种简便的样本收集方法。然而,对于婴儿和幼儿来说,这不是一种选择,因为他们需要一个细胞刷。虽然这种方法已用于几项大型流行病学研究,但标本间的DNA产量变化很大,必须解决细菌污染问题。DNA的稳定性保持良好的5天,从而允许样品运输新鲜。随着时间的推移,为了提高口腔细胞DNA的稳定性,DNA卡已经被用来在室温下存储这类DNA,据报道已经有好几年了。与手指穿刺相比,用DNA卡收集唾液的主要优点是无创性。然而,一个缺点是这些样本的DNA产量比血液样本的变化更大。此外,有时有必要在起初恢复率较低的病人身上重复这一程序。此外,不同的基因组可能在口腔中共存,这可能会干扰这些人正确的基因型分配。用细胞刷或漱口水收集的样本的重量比用dna采血卡收集的样品的重量要高,因此增加了邮寄的费用。
然后,当比较与这两张DNA卡相关的时间和成本时,方法是相似的。这两张卡片的主要区别在于基因分型所需的DNA数量,这确保了对FTA经典卡片的200种反应®使用等码卡的反应不超过100次®。然而,通过使用WGA和两种DNA卡,这种差异被小化了。FTA经典卡的使用®在执行洗脱协议时需要更多的时间。然而,不仅基因分型所需的DNA数量较少,而且血斑的干燥和血红蛋白的存在似乎也是微不足道的。等码卡®另一方面,虽然血红蛋白污染带来不便,但在隔离样本时,议定书证明更快。然而,这是可以避免的,如果血斑是干燥1周,如果一个前烤箱洗脱步骤和第二次清洗是添加到制造商的协议。
总之,考虑到我们设计的主要局限性(使用静脉穿刺血而不是指尖穿刺),我们的研究表明,两种DNA采血卡,等码卡。®或FTA经典卡®,方便常规临床实践中的遗传和药物遗传检测。
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