DNA采血卡测定维生素D与血清、全血标本类型及膳食回忆仪器的一致性（2）

田纳西州儿童呼吸倡议是一项对母婴动态的纵向研究，旨在了解婴儿呼吸道感染与哮喘和特应性疾病之间的关系。在2004-2008年期间，非低出生体重的健康婴儿及其生身母亲在婴儿时期登记，当时婴儿接受了病毒性下呼吸道或上呼吸道感染的治疗(N=630)，如前所述。在109名有血样的母亲中，他们的25-羟维生素D水平是通过实验室制作的采血卡来确定的。在这些妇女中，47%(50/109)的25 OHD水平通过全血检测，19%(20/109)使用可用的血清样本进行检测。仅在秋季、冬季和春季采集产妇样本，反映了病毒季节的研究登记期。

这项研究得到了范德比尔特大学的机构审查委员会的批准。在本研究中获得了参与者的书面知情同意。

血斑制剂

在实验室中，使用保存在−80度处的全血样本，将全血的3至12滴不重叠的滴在实验室提供的带有预印圆圈的dna采血卡上。血斑被风干至少30分钟，然后关闭DNA采血卡上的皮瓣。将完全干燥的样品冷藏并分批送到ZRT实验室(Beaverton，OR)进行维生素D测定。

25 OHD测量

25-OHD是从6mm斑点中提取出来的，经衍生化后，用上述方法进行LC-MS/MS分析。为了实现自动化而对其进行了修改。斑点从DNA采血卡(Wallac MultiPuncher)中打孔，用600 ul去离子水重新组合。加入600μl含甲醇的内标(D4-25-羟基维生素D 3)沉淀蛋白质，对样品进行旋涡处理。用C18固相萃取法提取上清液900μl。提取样品在室温下用0.1mg/mlPTAD(4-苯基-1，2，4-三唑啉-3，5-二酮)衍生化10 min。衍生样品经氮气吹干后，用50μl甲醇和20μl注入LC-MS/MS体系(VARIAN)。以20μl全血或10μl血清为对照，采用上述方法在ZRT实验室重复测定维生素D。对每种样品类型分别进行校准。

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